생각 남기기

사진은 언젠가 찍어뒀던 embryo. 현미경 하에서 fresh한 embryo를 잘 collection하는 것이 중요하다. Zona pellucida 부분이 탄탄한지 등등. 어~쩌다가 정말 어쩌다가 embryo를 collection할 필요가 있을 때가 있는데 😅 먼저, 동물이나 도구 등 다 가지고 있는 물품 제외하고 제일 필수 준비물은 M2 media일 것 같다. https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/product/mm/mr015?gclid=Cj0KCQiAuqKqBhDxARIsAFZELmLftAJiZbNBoIjb8m95CyJZ67GGBGowhsVPipuqfZ044-746qqGdAUaAuV_EALw_wcB M2 EmbryoMax Embryo Media Millipore M2 Medi..

* 오직 연구 실험용 protocol. 😎 ** BMSC: Bone marrow mesenchymal stromal/stem cell 1. Bone marrow에 needle을 넣어서 BMSC가 포함되어 있을 fluid를 뽑은 후에, tube에 옮긴 뒤 먼저 pipetting을 잘 해줌. 2. Ficoll-Pauqe media와 BM fluid를 1:1로 해서 1,500 rpm, 0.5 hr centrifuge 시켜줌. https://www.cytivalifesciences.com/en/us/shop/cell-therapy/media/ficoll-paque-plus-density-gradient-media-p-05824 Ficoll-Paque PLUS density gradient media - Cyti..

역시나 문서 정리의 일환으로 cellular senescnece induction에 대해서 노트. 유도는 H2O2로 간단하게 in vitro에서 하고, 주로 outcome을 SA-β-gal staining과 WB로 보는 것으로 생각하면 된다 😎 세포를 1X105 정도 35 mm dish에 깔아주고 4 hr 배양 200 uM H2O2를 10% FBS DMEM 2 ml로 해서 세포에 2 hr 처리 고농도 처리를 할 경우, 600 uM에 2 hr 처리 처리 시간에 변수를 주고 싶으면, 2 hr/ 4 hr 로 나눠줌 3일간 24 hr term으로 200 uM H2O2 처리를 해줌 1차 sampling Day 5 시점에 passaging 시켜줌 그 후, 다시 3일간 24 hr term으로 200 uM H2O2 처..

사진은 BrdU staining 한 거. 요즘에는 BrdU 잘 안 쓰는거 같지만 ㅎㅎㅎ 😣 근데 사실 그렇게 나쁘지 않은 방법이라고 생각한다. Multiple staining 할 때 같이 해서 그냥 카운팅 하면 되니까 편하고. BrdU staining 뭐... 적을 것도 없지만 문제는 BDA나 다른 tracer처럼 그렇게 생각보다 잘 되진 않는다. Clear하게 signal이 잘 나와야 하는데 직접 해보면 trouble이 나오기 십상이다. 그래서 잘 안 나오는 경우에는, BrdU kit를 편안하게 쓰는 것도 좋다. https://www.merckmillipore.com/KR/ko/product/BrdU-IHC-Kit,MM_NF-2760 BrdU IHC Kit | 2760 www.merckmillipore..

https://ss-salix.tistory.com/103 spinal cord injury 만들기. 210522 2021.05.22 - [신경과학] - pyramidotomy 하기. 210521 pyramidotomy 하기. 210521 글로써 실험적으로 동물 (마우스 기준) 에서 pyramidotomy (피라미드로 절제술) 하는 법을 적어보고 싶다. Pyramidotomy는 주로 한쪽만 ss-salix.tistory.com 요새 한창 문서 정리 중인데 예전에 드로잉 해놨던 것을 발견해서 기록용 업로드 😎 내가 이런 것도 그렸었나.... Mouse나 rat을 C부터 L까지 전부 열었을 때는 대략 위와 같은 모습을 보인다. Rat이라면 rongeur를 좀 써줘야 하는데, mouse라면 rongeur는 옵..

2021.05.22 - [신경과학] - spinal cord injury 만들기. 210522 2021.05.22 - [신경과학] - pyramidotomy 하기. 210521 이전 글들에 이어, 역시 글로써 실험적으로 동물 (마우스 또는 rat) 에서 optic nerve injury 모델을 만드는 법과 ocular injection 하는 방법을 적어보고 싶다. 실험용 동물에서 optic nerve injury를 만드는 목적은 먼저, 시신경에 대한 연구 측면도 있지만, central nervous system의 재생을 optic nerve를 이용해서 구현하고자 하는 경우도 많다. 즉, brain이나 spinal cord에서 현실적으로 신경재생의 효과를 내는 것이 PNS나 DRG를 이용하는 것보다 떨어지..

 언젠가 옛날 옛적에 적어 놨던 노트. 최신은 어떻게 하는지 모르겠다. 이 이후 cDNA로 infection 한 적이 없어서 🤣 노트에 메모하는 성의가 있었던 시기...😎 1. 주문한 cDNA가 오면 (E.coli 상태; 이번 실험의 경우 human pcDNA 3.1 plasmid를 사용함) LB agar plate 상에서 콜로니를 만들어 줘야 함. - A. LB agar는 agar 분말을 통해서 만들어주며 agar medium에 selection을 위해서 ampicillin을 넣어준다. - B. 나머지 E.coli 용액은 -80℃에서 storage. 2. E.coli 용액 10 ul 정도를 agar 위에 올려주고 스프레딩 해준다. - A. 이때, 작업 테이블의 토치를 켜두고 작업하도록 한다. - B...

2021.05.29 - [신경과학] - genotyping (유전형 분석) 개인 취향에 대해서. 210529 genotyping (유전형 분석) 개인 취향에 대해서. 210529 2021.05.27 - [신경과학] - IHC (면역조직염색) 개인 취향에 대해서. 210526 IHC (면역조직염색) 개인 취향에 대해서. 210526 일반적으로 IHC (immunohistochemistry; 면역조직염색법) 나 ICC법은 어느 랩에서나.. ss-salix.tistory.com 이번에는 IHC, genotyping 취향에 이어서 역시 어느 실험실이나 빈번하게 사용하는 Western blot (immunoblot)의 개인 취향에 대해서 적어보고 싶다. 역시 어느 방법을 사용해도 워킹은 어떻게든 되는 굉장히 일반..

2021.05.27 - [신경과학] - IHC (면역조직염색) 개인 취향에 대해서. 210526 IHC (면역조직염색) 개인 취향에 대해서. 210526 일반적으로 IHC (immunohistochemistry; 면역조직염색법) 나 ICC법은 어느 랩에서나 기본적으로 워킹하고 범용적인 방법이기 때문에 (PCR이나 Western, genotyping처럼 어떤 방식으로 하든 결과물은 나온다) 프 ss-salix.tistory.com IHC의 개인 취향에 이어, 실험에서 사용되는 genotyping (유전형 분석)에 대한 '취향'에 대해서 짤막하게 적어보고 싶다. 실험용 동물의 genotyping은 기초적인 루틴으로 많이 하는 작업인데 매우 귀찮은 작업 중에 하나일 것이다. 최근에는 굉장히 process를 단..

일반적으로 IHC (immunohistochemistry; 면역조직염색법) 나 ICC법은 어느 랩에서나 기본적으로 워킹하고 범용적인 방법이기 때문에 (PCR이나 Western, genotyping처럼 어떤 방식으로 하든 결과물은 나온다) 프로세스를 적기보다는 취향에 대해서 적어보고 싶다. 여기서 취향이란, 여러 가지 방법의 결과물 중에 이 방법이 마음에 좀 더 들었다 정도의 느낌이다. 파라핀 엠베딩을 하든, vibratome을 쓰든, cryostat을 사용하든 실험 계획과 맞는 방법을 쓰면 되는데 일단 cryostat 기준으로 적어본다. 먼저, cryostat에서 조직 자를 때, embedding 된 OCT 모퉁이 부분을 사다리꼴 모양으로 살짝 잘라주면 좀 안정적이다. 그리고 되도록 중국산 글라스는 사용..